吏部天官之子王金龙贪恋名妓苏三，一掷千金在所不惜，为其取名“玉堂春”。到床头金尽之时，王金龙被鸨儿逐出门外，流落关王庙中。卖花童子金哥送信于苏三，苏三夤夜前去关王庙相会，并赠以银子300两，令其进京赶考。

王金龙去后，苏三不再接客，鸨儿将其馁与山西富商沈雁翎为妾。沈雁翎之妻皮氏与赵监生私通，被苏三撞见，皮氏欲将苏三毒死，不料反将沈雁翎毒死，皮氏陷害苏三毒死亲夫，又在衙门上下打点，将苏三问成死罪。由解差崇公道将其解往太原。

王金龙考中状元，官放山西巡按，与三司会审苏三毒死亲夫一案。陪审之藩司无以复加必正、臬台刘秉义见王金龙举止失常，从苏三口供中获知王金龙与苏三特殊关系，乃代为玉成，平反冤狱，使二人得以团圆。

本剧为观众所熟知的玉堂春故事，出自《警世通言》卷24《玉堂春落难逢夫》。京剧折子戏有《嫖院》、《关王庙》、《女起解》、《三堂会审》等。各地方剧种均有此剧。

本剧唱徽调，其中《起解》一场之【西皮流水】与今京剧之唱腔、词句居然大同小异，疑京剧系从徽调改编。